采用共聚焦显微技术中的双光子激发荧光方法获得DHL细胞中5-氨基酮戊酸(5-ALA)代谢原卟啉IX(PpIX)荧光图像。结合Rhodamine123、DioC6(3)和LysoTracker Green三种细胞器荧光探针的使用, 采用双标的标记方法观察DHL细胞中5-ALA代谢PpIX在DHL细胞的定位分布, 进而利用Matlab软件对获得的定位的融合荧光图像进行相关系数计算。通过Matlab软件编写程序对获得的定位图像进行边缘检测、提取和分割等处理, 计算获得的线粒体相关系数r=0.564; 内质网相关系数r=0.465; 溶酶体相关系数r=0.366; 可以认为5-ALA代谢PpIX在线粒体、内质网、溶酶体三种细胞器区域均有分布, 但PpIX在不同细胞器聚集程度存在比较大的差异, 经过3 h的孵育代谢PpIX主要积聚于线粒体, 而溶酶体中积聚的最少。研究表明双光子激发荧光可成为定性或定量研究DHL细胞中5-ALA代谢PpIX以及PpIX在细胞定位的重要方法。