高倍率显微物镜具有小视场短焦距的特点,但利用常规测量方法难以准确测定其焦距。采用了一种基于放大率法多次基准传递的方法对高倍率显微物镜的焦距进行准确测定。该方法的原理是采用放大倍率法测试一枚远场共轭设计的低倍率显微物镜,获得该物镜的焦距,然后以此低倍率物镜测试高倍率显微物镜。利用该测试方法对一枚标称焦距为4 mm Nikon金相物镜进行了测试,并分析了测试误差,测试精度为0.0266 mm,相对标准差为0.664%。发现用于基准传递的物镜的选择会影响最终的测试精度,从理论上分析了选取合适基准物镜的标准。